【摘要】本研究采用新方法――体外吞噬法，新吞噬对象――酵母菌，以小白鼠作为试验动物，腹腔巨噬细胞为对象，对细胞生物学经典实验小鼠巨噬细胞吞噬实验进行了优化与改进，使实验观察变得更加简便、直观、经济。
【关键词】巨噬细胞；小鼠；吞噬功能；检测方法
细胞吞噬作用最早是单细胞动物摄取营养物质的方式，也是原始防御作用。通过对小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动的观察，可使学生加深理解细胞吞噬作用的过程及意义。本项目通过改用酵母菌作为吞噬颗粒，希望可以得到更全面、直观、生动的巨噬细胞吞噬观测效果。同时，改用体外吞噬法来检测巨噬细胞的吞噬功能，使实验更加简便、易行、经济。通过以上优化及改进，旨在探讨建立一种更为经济，简便直观的观察小鼠巨噬细胞吞噬效果的实验改良法。
一、材料
1．小白鼠腹腔注射液
6%淀粉肉汤。在100mL蒸馏水中加入牛肉膏0.3g，蛋白栋1g，氯化钠0.5g，加热后加入可溶性淀粉6g，促使溶解后煮沸灭菌，置4℃冰箱保存。用时水溶融化即可。
2．吞噬物
酵母菌菌液。将酵母菌接种于麦汁斜面培养基上，培养24小时后，用生理盐水反复吹打冲洗斜面培养基上的酵母菌，离心收集菌体，制成菌悬液后加热杀死菌体。用1％美蓝染色，反复生理盐水洗涤离心3次后，制成菌悬液，可长期4℃冰箱保存备用。
二、方法
在实验前一天，给小白鼠腹腔注射6%淀粉肉汤1mL/只，轻按小白鼠腹部，使悬液分散。24h后将注射过淀粉肉汤的小白鼠腹腔注射10亿/mL的酵母菌菌液1mL/只，颈椎脱臼法处死小鼠，用注射器从小鼠腹腔吸出腹腔液。在eppendorf管中各加入巨噬细胞悬液和酵母菌菌液各300µL，置37℃温箱保温20min。用滴管吸取混合液滴片，加盖玻片后直接用高倍镜观察，并随时滴片继续观察不同时期的吞噬状态。
三、效果
本实验与常规体内吞噬鸡红细胞法相比，具有以下特点：①改选酵母菌作为吞噬颗粒来观察巨噬细胞的吞噬效果。酵母菌体积极较小，与鸡红细胞相比更易被巨噬细胞吞噬，因此在有限的实验时间内更易观察到吞噬现象的三种阶段，吞噬现象观察更为生动全面。酵母菌还可预先被染色，与其它细胞区分明显，在显微镜下有更加直观、生动的观察，在室温适宜时，还可作吞噬过程的连续摄影，增加了实验的直观性。另外，酵母菌可长期保存，活化方法简易可行，较血细胞而言大大节省了实验费用；②改用直观简便的体外eppendorf管法来达到实验效果。在此法中，巨噬细胞和酵母菌各取适量于eppendorf管中，两者完全处于自由悬浮状态，有充分的接触机会，比在体内注入酵母菌更易全面接触，所以检测的吞噬指数更高，观察更为清晰直接。还可避免学生在注射鸡红细胞时常因注射部位的偏差，吸取腹腔液观察时常有鸡红细胞量过少的等问题出现，导致实验结果观察失败。③优化后实验可与动物免疫血清制备及其检测的实验相结合，使得老鼠实验成本大为降低，从而更加经济。总之，希望采用这种方法后，使巨噬细胞吞噬实验变得操作简单，易于掌握，费用降低，观察时清晰可辨，以达到较好的教学效果。
作者简介：
徐玲玲（1983― ），女，安徽池州人，助理实验师，硕士，研究方向：细胞生物学，营养学。
基金项目：浙江省自然科学基金（Y204097）
http://m.zgzsclpt.com/content/310038.html
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